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发布时间:  2017-04-11



ELSA实验出现的问题及解决方法

 

 

问题及现象 

原因 

解决办法 

整块板最终反应未产生颜色或整体吸光度值偏低 1. 抗体污染了缓冲液,导致酶标记物受到污染
2. 由于重复使用吸头导致抗体污染了缓冲液或酶标记物
3. 室温过低或试剂未回至室温
4. 洗涤用水未回升到室温5. 试剂过失效日期6. 试剂失效
1. 稀释抗体及酶标记物过程应当先吸取缓冲液后吸取被稀释物; 这样可以避免缓冲液受到污染 。
2. 不要重复使用吸头
3. 控制室温并确保试剂回至室温
4. 使洗涤水回升至室温
5. 更换新批号的试剂盒
 整行或整列板孔最终反应颜色异常  7. 手工洗板时相对应的吸头与移液器接触不严,导致未吸上洗涤用水或吸上的水量不够。
8. 洗板机洗板时相对应的管路阻塞,导致未注入洗涤用水或水量不够。
 7. 洗板前检查吸头是否接牢固,是否高矮一致并且在一条直线上。如果在安装吸头时感觉不易安装牢固请不要使用。曾发现过有的国内厂商的吸头不直,不易安装牢固,请不要使用,避免造成实验失败。
8. 检查管路是否阻塞、出水不畅并疏通,检查注水量是否充分。
 标准曲线不成良好的S型,请与盒中的质检报告曲线对比  

9. 手工洗板步骤失败。洗涤用水被板孔中被洗涤物污染

10. 洗板机洗板步骤失败。洗涤次数不够及注水量不够

11. 洗板后未立即进行下一步操作,中间间隔过长12. 当板孔中含有两种以上的试剂时未能充分混均

 

9. 注意加洗涤水的移液器吸头尖必须置于微孔板上板面上方约 0.5厘米处打出洗涤水,绝对避免注入板孔中的液体接触到或溅到移液器管尖上而将板孔中的物质带回到洗涤用水中10. 洗板机洗板:注水量应该约400ul,注水后的液面应该接近板平面并且应该洗六次以上。

11. 洗板后立即进行下一步操作,不要中断实验去从事其它事情

12. 轻轻振荡板并在桌面上做圆周运动以混均或用振荡器混均。

 零标准的吸光度值接近或低于第二标准吸光度值  

13. 洗板后未立即进行下一步操作,中间间隔过长导致板孔干燥

14. 试剂盒或水回温不够

 

13. 洗板后立即进行下一步操作,不要中断实验去从事其它事情

14. 确保试剂及洗涤水回升至室温

 整块板最终反应颜色的吸光度值都很高  15. 酶标记物污染了缓冲液或盒内的其它试剂、吸过酶标记物的吸头再次使用。  15. 稀释酶标记物过程应当先吸取缓冲液后吸取被稀释物; 这样可以避免缓冲液受到污染 。不要重复使用吸头。
 平行性不好  

16. 加样及加试剂量是否准确

17. 加样及加试剂的操作是否正确,
18. 洗板问题

 

16. 使用较好的移液器及吸头

17. 正确操作a加酶标记物到孔底部;b加标准或样品到孔底部;c 加抗体到孔底部。但吸头尖不要触到2/3高度以下的孔壁。
18. 参阅上面关于洗板9,10条目

 样品的高背景干扰或假阳性  

19. 样品处理过程中转移有机溶剂时将水带进20. 干燥有机溶剂时不彻底21. 离心时未达到规定的离心力,使所得到的液体发混

22. 离心时的温度未达到要求
23. 有机溶剂随被测样品带进微孔中

 

19. 转移有机溶剂时,宁可少取也不要将水带进。

20. 加长干燥有机溶剂的时间,要保证干燥彻底。

21. 加大离心转速22. 降低离心温度23. 不要将有机溶剂带进微孔中

     
     

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